两种色谱和两种酶方法的组合用于分析来自Kocuria属的革兰氏阳性细菌的脂质的分子种类。革兰氏阳性细菌含有大部分支链脂肪酸(FA),尤其是异构和/或异构FA。在三种不同温度(20,28和37℃)下培养两株K.rhizophila,并通过亲水相互作用液相色谱(HILIC)分离大部分磷脂,即磷脂酰甘油(PG)的分子种类的混合物。通过磷脂酶C酶促水解PG并衍生游离OH基团后,通过反相HPLC分离sn-1,2-二酰基-3-乙酰基三酰基甘油(ACTAG)。分子种类如i-15:0/i-15:0/2:0,ai-15:0/ai-15:0/2:0和15:0/15做试管婴儿 医院:0/2:0(直链)通过液相色谱-正电喷雾电离质谱法鉴定。含有相同碳的异,反异构和直链FA的标准品和天然化合物的串联质谱是相同的。因此,为了鉴定两种区域异构体,即i-15:0/ai-15:0/2:0与ai-15:0/i-15:0/2:0的比例,它们被胰脂肪酶切割。获得游离脂肪酸(FFA)和2-单酰基甘油(2-MAG)的混合物。通过TLC分离并酯化和/或酯交换后,通过GC-MS定量脂肪酸甲酯,从而测定区域异构体的比例。已经表明,PG的比例(包含大部分i-15:0/i-15:0,i-15:0/ai-15:0和/或ai-15:0/i-15:0和ai-15:0/ai-15:0分子种类)显着影响在不同温度下培养的细菌细胞的膜流动。
关键词:革兰氏阳性菌;RP-HPLC/MS-ESI(+);支链脂肪酸;二酰基甘油;酶水解;磷脂酰甘油。
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